擴增產物的檢測1．1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測：取10ulPCR擴增物作1.5%瓊脂糖凝膠電泳、0.5μg/ml溴化乙錠染色，以PGEM-3ZfDNA-HaeⅢ為分子量標準，置紫外透射儀觀察結果。

UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGGUU2：GTGGTGACATACCATTAACPCR擴增傳統(tǒng)的方法為的反應體積為100μl，含5x反應緩沖液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4種dNTP各200μmol/L以及引物對各25pmol/L。上述成分預先一次性分裝于0.5ml離心管，-20℃?zhèn)溆?。臨用加模板DNA2μl，短暫離心，加100μl礦物油覆蓋?，F(xiàn)在試劑已商品化，反應體積為25μl，單管已分裝好，只要加入模板DNA即可。置DNA擴增儀進行40次循環(huán)擴增。每次循環(huán)包括90℃變性45s，55℃退火30s和72℃延伸40s三個步驟。每次擴增均應作陰陽性對照。引物設計引物來源于解脲脲原體，脲酶基因序列：將宮頸管內或尿道內刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES緩沖液，置37℃裂解60min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μlTE緩沖液。2．解脲脲原體DNA提?。簶吮咎幚?．取材部位為子宮頸管，男性為尿道，將滅菌白金耳深入宮頸管或尿道1cm左右，轉動數(shù)圈，停留約30s，取出后置標本緩沖液中。3．基因診斷：利用DNA探針對支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高，用聚合酶鏈反應，敏感性、特異性均高。具體檢測方面如下：血清學診斷試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗敏感性高：微量免疫熒光法具有快速特點。2．血清學鑒定法：最常用的是瓊脂擴散法，即將支原體接種到瓊脂皿上。然后再用浸過適量血清的濾紙放到瓊脂表面，觀察哪一種能抑制支原體生長。也可用瓊脂表面的菌落作熒光抗體染色法，用落射熒光顯微鏡觀察，此法的優(yōu)點是可以利用最初生長在瓊脂表面上的菌落而不必將支原體傳代。b．常用培養(yǎng)基為牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鮮酵母浸液，10-20%動物血清及0.5%氯化鈉，還可加葡萄糖和精氨酸以促進MH和MG生長，加入尿素以供UU代謝，適量加青霉素抑制雜菌。a．采集標本，一般為泌尿生殖試子或刷片，少數(shù)取前列腺液，精液、關節(jié)液，或取輸卵管，直腸活檢物，近年來用初段尿標本離心物，以取代尿道拭子。拭子取材時，將拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。該方法容易造成尿道損傷及繼發(fā)感染。用時須慎重。女性則需先清潔宮頸鱗狀與柱狀上皮結合部，用細胞刷收集宮頸標本，能增加感染細胞的數(shù)量，較棉拭子敏感性高。1．支原體培養(yǎng)：子宮內膜炎診斷實驗診斷支原體感染的實驗室診斷主要是支原體的培養(yǎng)和血清學鑒定，目前主要采用基因診斷。六、子宮內膜炎診斷及鑒別診斷子宮內膜炎診斷臨床診斷有不潔性交史，有尿道、陰道分泌物及排尿灼痛表現(xiàn)者而又排除其他病原體感染的可能性，取尿道或宮頸分泌物涂片，在1000倍顯微鏡下可見多形核白細胞≥5個，可作初步診斷。支原體感染常見的合并癥為輸卵管炎，少數(shù)患者可出現(xiàn)子宮內膜炎及盆腔炎。女性患者多見以子宮頸為中心擴散的生殖系炎癥。多數(shù)無明顯自覺癥狀，少數(shù)重癥病人有陰道墜感，當感染擴及尿道時，尿頻、尿急是引起病人注意的主要癥狀。感染局限在子宮頸，表現(xiàn)為白帶增多、混濁、子宮頸水腫、充血或表面糜爛。感染擴及尿道表現(xiàn)為尿道口潮紅、充血、擠壓尿道可有少量分泌物外溢，但很少有壓痛出現(xiàn)。亞急性期常合并前列腺感染，患者常出現(xiàn)會陰部脹痛、腰酸、雙股內側不適感或在做提肛動作時有自會陰向股內側發(fā)散的刺痛感。肛診時前列腺縱溝不明顯或表面類似核桃殼凹凸不平，少數(shù)病例B型超聲波診斷可證實不同程度的增大。合并副睪炎者不多見。